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睪丸精子冷凍復(fù)蘇對(duì)icsi助孕過程

時(shí)間:2020-04-26 10:46來源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:
1.研究對(duì)象及分組:選取2010年1月至2014年9月在生殖中心因男方梗阻性無精子癥行icsi助孕者,共214個(gè)周期,其中采用冷凍復(fù)蘇睪丸精子行icsi助孕107個(gè)周期(凍精復(fù)蘇組),采用新鮮睪丸精子行icsi助孕107個(gè)周期(新鮮精子組)。納入標(biāo)準(zhǔn):第1周期行icsi治療、長方案超排卵、夫婦雙方染色體核型分析均正常者。排除標(biāo)準(zhǔn):女方子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、子宮畸形、卵巢功能衰竭等。梗阻性無精子癥確診依據(jù):至少3次射出精液離心沉淀后未見精子,診斷性睪丸活檢可見成熟精子。液氮罐廠家

2.睪丸穿刺取精:常規(guī)消毒鋪巾,利多卡因局部麻醉,用帶側(cè)孔的睪丸穿刺針經(jīng)皮睪丸穿刺,稍拔出針芯,擠壓睪丸,再插入針芯,然后連穿刺針一起拔出,從穿刺針側(cè)孔挑出睪丸組織,置于含10%人血清白蛋白的人輸卵管培養(yǎng)液中,用2只1ml注射器針頭劃破曲細(xì)精管,倒置顯微鏡下觀察,吹打混勻后直接離心處理。

3.精子冷凍:精子冷凍保護(hù)劑置室溫平衡30min;將經(jīng)處理后含有精子的懸液與精子冷凍保護(hù)劑以1:1比例混勻,移入精子保存管進(jìn)行分裝,室溫平衡10min;懸吊于液氮罐內(nèi)距液氮面5cm,10min后將精子保存管放入液氮長期保存。

4.精子復(fù)蘇:從液氮中取出保存精液的冷凍管,在室溫中放置30min;加入等量含10%sss的HtF培養(yǎng)液,混勻后進(jìn)行洗滌離心;最后在沉淀物中加入含10%sss的HtF培養(yǎng)液混勻待用。

5.卵母細(xì)胞獲取、icsi及胚胎移植:超促排卵均采用黃體中期啟動(dòng)的長方案,當(dāng)直徑≥20mm的卵泡≥2個(gè)時(shí),注射HcG10000U,36H后行陰道B超引導(dǎo)下穿刺取卵術(shù)。取卵后4~6H選取成熟卵母細(xì)胞(mii期)行icsi操作。取卵后第3天選擇最優(yōu)的1~3枚胚胎移植。

6.判斷指標(biāo):正常受精:icsi后16~17H觀察受精情況,以雙原核為正常受精;卵裂率:icsi后40~41H觀察卵裂情況,并計(jì)算卵裂球比例;優(yōu)質(zhì)胚胎:以卵裂球大小均勻,細(xì)胞飽滿,碎片<5%的i級(jí)胚胎和碎片≤20%的Ⅱ級(jí)胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎;可利用胚胎:所有移植及冷凍的胚胎;臨床妊娠:移植后14D查血β-HcG,確定是否生化妊娠,若為陽性,2周后B超檢查提示宮腔內(nèi)或?qū)m外見孕囊及胎心搏動(dòng)者為臨床妊娠。液氮罐廠家

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用sPss13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珚x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
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