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液氮罐中液氮研磨如何操作

時間:2020-06-10 10:30來源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:
液氮研磨如何操作?先了解一下液氮研磨原理吧!

液氮容器的準(zhǔn)備

液氮一般保存于液氮罐中。實驗前先準(zhǔn)備一個保溫桶,將適量液氮轉(zhuǎn)移至保溫桶中,同時還要準(zhǔn)備一個不銹鋼或塑料湯勺,湯勺的柄不夠長時要想辦法加長,以免凍傷手。

組織的處理及用量

任何組織在獲得后如不立即使用,要盡快保存在低溫環(huán)境中(一196℃液氮中速凍,一70℃保存)。使用時,植物組織應(yīng)當(dāng)先用自來水清洗外表的泥沙,用單蒸水沖洗兩遍,用75%乙醇浸洗約30秒,再用滅菌雙蒸水沖洗兩遍,用無菌濾紙吸干,然后根據(jù)需要取適當(dāng)部位的組織。動物組織不必清洗,但要盡量剔除周邊的組織及血塊。組織的取量要比實際需要量大1一2倍,因為研磨時部分組織會粘在研缽和研棒上,會致部分組織樣本丟失。

研缽的固定

我們在實驗時發(fā)現(xiàn),研缽在加液氮后溫度很低,外表會形成許多冰晶,用力研磨組織時易打滑,研缽內(nèi)的組織液氮混合物很容易濺出,造成組織丟失,也容易凍傷手。如果在研缽下墊些紗布或濾紙,雖不易滑動,但由于緩沖作用,研磨時不受力,不足取。后來我們作了如下改進(jìn):一是做個木支架,即選一塊厚約兩寸的木板,在上面挖個半球形圓洞(大小根據(jù)研缽大小而定),木板兩端留一定長度以備手握之用,使用時將研缽卡在半球形洞中,既穩(wěn)當(dāng)又不會凍傷手;二是備一條干凈的毛巾或紗布(干的),折成長條形,將研缽包圍起來,兩端合并后用手抓住,這個方法簡單實用,但要特別小心,以免凍傷。液氮罐

研磨方法

空缽先用液氮預(yù)冷,再將研棒的上端用紗布包裹(用力時手不會痛),組織**切成薄片,研磨時不易濺出,也更容易磨碎,研棒**頂著手心,這樣便于用力。研磨過程中要避免液氮干涸,研磨至細(xì)粉即可。待液氮剛蒸發(fā)完時,用一個小藥勺取出所需用量進(jìn)行下一步實驗,或者將組織粉末裝人容器內(nèi),保存于一70℃的溫度下,以備下一步實驗用。使用得當(dāng)?shù)囊旱心ソM織法,將為下一步實驗成功奠定了基礎(chǔ)。值得一提的是,操作中所有接觸的器皿及耗材須清洗干凈并消毒。如果研磨組織用于提取RNA時,使用的器皿及耗材必須采用焦碳酸二乙醋(DEPC)滅活RNase并進(jìn)行高壓消毒處理。
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